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详细介绍
膜电位改变：短时高压电场（通常500–4000 V/cm）使细胞膜磷脂双层发生极化，形成亲水性临时孔隙（直径≈10 nm），持续时间毫秒级。
分子递送机制：带负电的DNA/RNA在电场驱动下以电泳方式穿过孔隙进入胞质，后续依赖细胞自身机制扩散至核内（核膜无有效电场作用，故“核电转"为伪概念）。
可逆性与安全性：
可逆电穿孔：低强度脉冲后膜修复完整，细胞存活率>90%。
不可逆电穿孔：高强度脉冲致膜结构yong久破坏，用于肿瘤消融（非基因操作）。
| 参数 | 作用 | 典型值 |
|---|---|---|
| 电场强度 | 决定孔径大小与细胞存活率 | 哺乳细胞：100–500 V/cm |
| 脉冲时长 | 影响分子渗透深度 | 1–10 ms |
| 脉冲波形 | 方波（均一渗透）vs 指数衰减波（能量渐变） | 方波为主 |
| 缓冲液离子浓度 | 高导电性介质增强电流效率，但需避免电解损伤 | 低盐溶液（如Opti-MEM） |
注：物种差异性显著，如小鼠受精卵需30V脉冲（3ms时长+97ms间隔，7循环）。
样本制备：
收集受精卵（体内/体外受精），用低盐缓冲液（如Opti-MEM）清洗3次，去除血清干扰。
电转体系构建：
将受精卵与目标分子（如CRISPR/Cas9核糖核蛋白）混合，置于电转杯或定制电极槽（如LF501PT1-10铂金电极）。
脉冲施加：
优化参数（如小鼠：30V，3ms脉冲×7循环），脉冲间隔97ms避免过热。
复苏培养：
电转后立即用M2培养基清洗，转入KSOM培养液恢复，37℃/5% CO₂孵育至囊胚期。
原理：跳过体外操作，直接对孕鼠输卵管壶腹部施加电场，转染体内受精卵。
流程：
孕鼠麻醉后暴露输卵管。
注入外源DNA溶液至壶腹部。
定制电极夹住输卵管施放电脉冲（参数同体外）。
优势：
避免体外培养损伤，胚胎存活率提升20%。
已成功应用于小鼠、大鼠，潜力扩展至猪、猴。
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