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详细介绍
电融合是一种利用电场诱导细胞膜结构改变，促使两个或多个细胞融合形成杂交细胞的技术。其核心原理基于电穿孔效应的延伸：
细胞膜极化与排列：
交流电场（AC，频率0.5–1.5 MHz）使细胞表面电荷极化，形成偶极子，驱动细胞沿电场线紧密排列成"珠链状"（双向电泳效应）。
膜穿孔与融合触发：
短时高压直流脉冲（DC，强度1–3 kV/cm，脉宽10–50 μs）击穿相邻细胞的接触区细胞膜，形成临时孔隙，脂质双层在表面张力作用下重组融合。
细胞质混合与修复：
膜融合后胞质互通，细胞器重新分布，最终形成完整异核体（细胞核暂未融合）或多核融合细胞。
关键突破：1978年Zimmermannshou次实现植物原生质体电融合，奠定技术基础。
| 细胞类型 | 处理方法 | 目标 |
|---|---|---|
| 植物原生质体 | 纤维素酶/离析酶消化细胞壁 → 蔗糖梯度纯化 | 获得无壁裸露细胞 |
| 动物细胞 | 低渗缓冲液（0.3M甘lu醇）洗涤 → 调整密度至10⁶ cells/mL | 去除血清干扰，增强电导率 |
| 卵母细胞/胚胎 | 透明带酶解（如链霉蛋白mei）→ 去除卵丘细胞 | 暴露细胞膜便于接触 |
仪器配置：ECM2001+、Multiporator等系统（集成AC/DC双功能）。
核心参数：
| 步骤 | 参数范围 | 作用 |
|---|---|---|
| AC排列 | 频率0.5–1.5 MHz，电压50–150 V | 细胞定向排列成链 |
| DC脉冲融合 | 场强1–3 kV/cm，脉宽10–50 μs × 1–3次 | 击穿接触区细胞膜 |
| 缓冲液 | 低离子强度（0.3M甘lu醇 + 0.1–1mM Ca²⁺） | 增强电导率，促进膜重组 |
复苏培养：37℃培养液静置30分钟，修复细胞膜。
杂交细胞筛选：
HAT培养基（杂交瘤技术）或荧光染料标记追踪融合效率。
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