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CRISPR/Cas12b（原称 C2c1）属于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系统，是继 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因编辑工具。其核心特征包括：
双 RNA 引导机制：
需 crRNA 与 tracrRNA（可融合为 sgRNA）共同引导靶向切割，兼具 Cas9 与 Cas12a 的部分特性 。
切割模式：
单一 RuvC 结构域 切割双链 DNA，形成 5-6 nt 的黏性末端（5' 突出），利于同源重组修复（HDR）。
PAM 识别：
依赖 T-rich PAM 序列（如 5'-TTN-3'），扩展了 AT 富集基因组的编辑能力 。
| 特性 | Cas12b | 对比 Cas9/Cas12a |
|---|---|---|
| 蛋白大小 | 约 1,100 氨基酸（最小） | 比 Cas9（1,600 aa）和 Cas12a（1,300 aa）更小 |
| RNA 需求 | 需 crRNA + tracrRNA（可融合为 sgRNA） | 比 Cas12a（仅需 crRNA）复杂，但比 Cas9 简化 |
| 热稳定性 | 温度敏感型（40–55℃激活） | 需工程化改造以适配哺乳动物细胞 |
低脱靶率：
GUIDE-seq 检测显示脱靶率 显著低于 Cas9（错误插入/缺失减少 >50%）。
高特异性：
crRNA 引导序列更长（>42 nt），靶向精度更高 。
编辑模式：
诱导 纯插入突变率低，更倾向于产生小片段缺失，减少功能不可预测性 。
病毒载体适配性：
小分子量更易包装进 AAV 或慢病毒载体，提升体内递送效率 。
| 参数 | Cas12b | Cas9 | Cas12a |
|---|---|---|---|
| PAM 序列 | 5'-TTN-3'（T 富集） | 5'-NGG-3'（G 富集） | 5'-TTTV-3'（T 富集） |
| 切割末端 | 黏性末端（5' 突出） | 平末端 | 黏性末端（5' 突出） |
| 反式切割活性 | ❌ 无 | ❌ 无 | ✅ 有（可切割 ssDNA） |
| 多基因编辑 | 需多 sgRNA | 需多 sgRNA | ✅ 支持 crRNA 阵列 |
注：Cas12b 切割模式使其在 基因治疗 中避免产生新表位，降低免疫风险 。
抗病毒治疗：
HIV ：在 T 细胞中单次编辑即可清除全部传染性 HIV，效率优于 Cas9 。
遗传病修复：
联合 HDR 通路实现 β-地中海贫血基因精准修复，血红蛋白恢复至正常水平 。
肿瘤免疫：
编辑 PD-1/CTLA-4 双靶点，降低 CAR-T 细胞耗竭 。
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